Diabetologia：介导但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次不止现人体内自身抗棒状到不止现1型号高血压医学病征的实质性率在儿童时期就有很好的描述，多个人体内自身抗棒状非典型的儿童里面有70%在血清转换后10年内患上高血压，而随访15年的儿童这一比率增高到84%。比起，占多数医学1型号高血压一半以上的型号1型号高血压的发病组态还没有人受益充分的研究者。

越来越多的人开始可用依此子系统来定义1型号高血压的实质性：个棒状在不止现多种人体内自身抗棒状时进入第1下一阶段，不止现血糖精神状态时进入第2下一阶段，不止现病征时进入第3下一阶段。一些多发人体内自身抗棒状非典型的个棒状，在1期和2期，实质性较慢，并工业发展为发病的1型号高血压。我们之前描述了一分组在首次化验到多种人体内自身抗棒状样本后数10年无高血压的极慢实质性者，这分组病征人数再加，但特征非常明确。随后，我们推测人体内自身免疫特异性CD8+T细胞化学反应在实质性快速的病征里面基本不发挥作用，但在早先发病和长期发挥作用的高血压病征里面很较难化验到。这可能说明了，与实质性病征比起，这些病征自身免疫化学反应的闭环增强。

早期研究者说明了，尽管闭环性T细胞(Treg)数量长星期，但高血压病征发挥作用一些基本功能缺陷，其里面包括对IL-2的化学反应并能提高。此外，高血压病征里面的物理现象CD4+T细胞可能对闭环更具抵抗性，表现为物理现象T细胞的抑制作用减弱，自然激发的Treg和棒状外激发的诱导Treg，以及免疫经历的CD4+T细胞里面IL-2化学反应减弱。本研究者的目的是描述了CD4+闭环性T细胞(Treg)在一小群极快速实质性者里面的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群为基础的纵向研究者，在21岁表列出院的病征亲属里面检查1型号高血压的危险因素。我们之前描述了长期快速实质性者的特征，他们保持多重人体内自身抗棒状非典型超过10年，但没有人不止现高血压的医学病征，慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持无高血压并乐意提供大量血液样本的快速实质性者扩及T和B细胞基本功能分析。在迄今的研究者里面，8名慢实质性者(SP分组)，里面位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的人体内自身抗棒状非典型。所有的自发性都处于1型号高血压实质性的1期，尽管一些人随后失去了人体内自身抗棒状对某些免疫的非典型化学反应，然而，一名病征已经处于2期数6年，但没有人不止现医学病征，一名病征被诊断为高血压，该受试者72岁，在采集实验样本时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该供棒状展开了单独分析。分离外周血单个连锁反应细胞(PBMCs)，转用多参数流式细胞妖术和T细胞抑制作用试制分析供棒状里面Treg的阈值、表观号和基本功能。可用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、连续性和回归)展开无都由聚类分析，分析Treg表观号。

结果：与肥胖症供棒状比起，来自慢实质性棒状的潜意识CD4+T细胞的都由聚类推测，应答的潜意识CD4+ Treg阈值增高，与糖皮质激素诱导的TNFR相关细胞(GITR)暗示增高有关。一名HbA1c下降时的病征与实质性快速者和反之亦然的对照分组比起，Treg谱相同。基本功能分析说明了，与肥胖症供棒状比起，来自快速实质性棒状的Treg酪氨酸的CD4+物理现象T细胞抑制作用引人注意受损。表现为对物理现象CD4+T细胞CD25和CD134暗示的抑制作用增高。

由此可知1 深入的表观号分析推测，CD4+Treg冠状病毒在慢实质性队列里面增高。由FlowSOM作用于的Treg室，挤满在来自所有供棒状的活CD4+CD45RA -细胞上。根据上面物暗示鉴定不止10个元簇:潜意识T细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;潜意识T cell_4;CD49b潜意识T细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)可用9个多种不同Treg上面作用于的10个元簇的MST。每个结点代表一个协同(100个协同)，较小的元协同(10个元协同)在结点分组周围上色。每个结点里面的煎饼由此可知声称单个上面的暗示级别。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测整棒状上面暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)作用于由此可知，以及FlowSOM识别子系统的每个元簇的覆盖物。(e-l)相对稀土元素为每个metacluster箱终点站由此可知(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP分组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +潜意识T细胞(h)、潜意识T cell_1(i),潜意识T cell_2 (j),潜意识T cell_3 (k) n d CD49b潜意识T细胞(l)。蓝色橘色代表捐**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩化验。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 可用CITRUS的实测号证实，Treg阈值的增高是实质性快速的标志。分级门控(a - f)和柑橘分析(g-k)相当SP自发性和反之亦然的HD自发性在CD4+CD45RA−T细胞上的差异。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群棒状的代表性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示展开分离，模拟FlowSOM群棒状。(b) HD(黑点)和SP(布氏)分组以及供棒状SP 606(蓝色)里面CD25+ cd127的阈值摘要由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控偏序的箱终点站由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇螺旋形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度着色，左下角突不止的簇被识别子系统为SP和HD队列间的多种不同。(j)箱终点站由此可知推测了在SP(布氏)和HD(灰点)分组里面，CITRUS潜意识Treg_3和Treg_4的相对稀土元素(比率)。(k)直方由此可知推测每个簇的表观号(粉红色)和Treg上面相对暗示与历史背景暗示(粉红色);上列，CPUTreg_3;比如说一行，CPUTreg_4。历史背景与所有其他簇里面上面的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon选取符号秩化验

由此可知3 与肥胖症献血者比起，实质性快速者潜意识treg的GITR增高。每个潜意识CD4+T细胞元簇(潜意识T细胞_1;潜意识T cell_2;潜意识T cell_3;CD49b +潜意识T细胞;HLA-DR + GITR +潜意识T细胞;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)化验每个暗示上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的暗示热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)潜意识Treg_4元簇里面所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，推测直方由此可知(c)和摘要由此可知(d)。Wilcoxon选取符号秩和化验，p< 0.07(蓝色)所有供棒状包括，p< 0.05(粉红色)供棒状SP 606和反之亦然的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR暗示，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(蓝色)串联，推测直方由此可知(e)和摘要由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon选取符号秩化验

由此可知4 来自快速实质性的CD4+ treg细胞压制物理现象CD4+T细胞的并能提高。SP分组用粉红色的终点站和橘色声称，HD分组用红色的终点站和橘色声称，蓝色的终点站/橘色声称供棒状sp606。可用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上面为CFSE, Treg按辨别的比率滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞，培育不止3同一天展开流式细胞妖术化验。(a-d)与CD4+这样的话者相对应的treg培育不止(自棒状)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育不止。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。可用非典型对照(应答的响应细胞仅有treg)计算抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

由此可知5 物理现象CD4+T细胞对快速实质性的T细胞再生的抑制作用更敏感。SP分组用粉红色的终点站和橘色声称，HD分组用红色的终点站和橘色声称，蓝色的终点站/橘色声称供棒状sp606。可用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上面，treg按辨别的比率滴定。用抗CD3 /28微珠再生细胞，培育不止3同一天展开流式细胞妖术(CD25反染)和细胞因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育不止。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE抑制作用次之(b)。(c,d) CD25抑制作用次之(c)和CD134抑制作用次之(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育不止里面的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相当测试

结论：我们证明了的结论是，来自快速实质性子的再生潜意识CD4+Treg在GITR暗示里面受益了扩展和丰富，务实了进一步研究者Treg在1型号高血压风险个棒状里面的异质性的必要性。

原文不止处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28